Биотинилирование нуклеиновых кислот

Биотинилирование нуклеиновых кислот * біятыніляванне нуклеінавых кіслот * biotinylation of nucleic acids or b. or biotin labelling — введение биотинилированных нуклеотидов (напр., комплекс биотина с dАТФ) в ДНК методом ник-трансляции (см.), с помощью ПЦР (см. Праймер) или мечением 31-конца ДНК. Обнаружение метки основано на высокой степени сродства авидина и/или стрептавидина к биотину (Kd = 10 -15 М). Обычно используется фермент — авидиновый (стрептавидиновый) конъюгат, который позволяет наблюдать ферментативную реакцию при использовании хромогенных субстратов. Биотинмеченные зонды могут также использоваться при гибридизации in situ в метафазных хромосомах. Гибридные молекулы обнаруживаются методом иммунофлуоресценции с использованием антибиотиновых антител и антител с флуоресцентной меткой. Сигнал флуоресценции обнаруживается с помощью соответствующих приборов. Использование биотинилированных зондов имеет преимущества перед радиоавтографией (см.), поскольку не требуются изотопы и сигнал может быть получен в течение нескольких часов.